N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠矽肺的结缔组织生长因子和ERK1/2表达的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠矽肺纤维化模型肺组织中胶原含量、结缔组织生长因子(CTGF)和细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)表达的影响.方法:选用非暴露式气管灌注法复制大鼠矽肺模型,并给予AcSDKP,采用羟脯氨酸测量法定量分析肺组织中总胶原蛋白的含量,免疫组织化学法、免疫印迹法检测肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2及ERK1/2蛋白的表达.结果:AcSDKP治疗组胶原含量低于相对应的矽肺模型组.与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2蛋白表达均增加;与相应矽肺模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2蛋白表达均明显降低.而各组间比较ERK1/2蛋白表达无明显改变.结论:AcSDKP可能通过阻断ERK1/2途径抑制了CTGF的表达,从而发挥抗矽肺纤维化的作用.     

骨髓间充质干细胞抑制转化生长因子-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞间质化

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)是否通过抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化,进而发挥其抗纤维化的作用及其机制。方法培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系RLE-6TN细胞,用5μg/L的TGF-β1诱导分化,并分为对照组、转化生长因子(TGF)-β1刺激组、BMSCs干预组。采用倒置相差显微镜观察RLE-6TN细胞的形态变化;免疫荧光法检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的定位;Western blotting法检测E-cad、α-SMA、p-Smad3、Snail1蛋白的表达。结果在TGF-β1的诱导下,肺泡Ⅱ型上皮细胞逐渐向肌成纤维细胞发生形态改变,由上皮细胞的鹅卵石状变成间充质细胞的梭形或纺锤形,且伴随着上皮标志物E-cad表达降低,而间充质细胞标志物α-SMA表达上调;给予BMSCs干预后,间充质化有所抑制,表现于细胞形态趋于上皮型,且上皮标志物E-cad表达上调,间质标志物α-SMA表达减少。与对照组相比,TGF-β1刺激组p-Smad3、Snail1蛋白表达上调。给予BMSCs干预后p-Smad3、Snail1蛋白表达显著降低。结论 BMSCs可能通过阻断TGF-β1/Smad3信号转导通路,抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化,从而抑制上皮细胞-间充质转化的进程。     

db/db小鼠肝脏中实时定量逆转录PCR内参照基因及标准化方法的评估与整合（英文）

目的:实时定量逆转录PCR(RT-q PCR)结果的标准化对于保证最终结果的准确性尤其重要。常用的标准化方法包括用加入的核酸量校正(ΔCt法)、用单个内参照基因校正(ΔΔCt法)和用统计学软件计算多个内参照基因的几何平均值进行校正。我们在db/db小鼠肝脏中对各种校正方法进行评估。方法:用ge Norm和NormFinder两种软件评估ACTB、e IF5、GAPDH、HMBS、HPRT1、Polr2A和RPLP0共7个内参照基因,以肝脏脂质合成相关基因Thrsp、SCD、SREBP1c和FAS作为目的基因。结果:应用ΔCt法,db/db小鼠肝脏中所有目的基因及GAPDH的表达显著升高(P0.05)。ge Norm计算认为ACTB和HMBS最稳定。Norm Finder计算认为ACTB最稳定,而GAPDH和RPLP0为最佳组合。以单个基因ACTB或RPLP0,以及ACTB与HMBS,或GAPDH与RPLP0的几何平均值进行校正,db/db小鼠肝脏中除SREBP1c以外,Thrsp、SCD1和FAS的表达均升高(P0.05)。结论:用ΔCt法校正RTq PCR的结果稳定并具有生物学意义。统计学软件ge Norm或Norm Finder应与ΔCt法整合使用。     

依达拉奉对SAH大鼠JNK信号通路及海马区神经细胞自噬的影响

目的探讨依达拉奉对蛛网膜下腔出血大鼠JNK信号通路及海马区神经细胞自噬的影响。方法雄性SD大鼠40只,随机等分为假手术组(Sham组)、SAH模型组、依达拉奉治疗组(Edaravone组)、JNK抑制剂组(SP600125组)。改良血管内穿刺法制成大鼠SAH模型;SP600125组于建模前30min,侧脑室注射SP600125(3μg/μl,10μl);Edaravone组于建模后5mg/kg Edaravone腹腔注射,12 h后重复给药。24h处死,检测各组海马区神经元形态、数量及Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-JNK蛋白的变化。结果与Sham组相比,SAH组海马区神经元排列紊乱、细胞多呈三角锥形、存活数量明显减少,(P0.05);Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-JNK表达升高,(P0.05)。与SAH组相比,Edaravone组、SP600125组神经元坏死率明显下降、形态正常细胞数增多,(P0.05);Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-JNK表达明显降低,(P0.05)。结论依达拉奉可降低SAH大鼠海马区神经元Beclin-1和LC3-Ⅱ表达,减轻SAH后早期脑损伤,其可能是JNK通路依赖性的。     

齐墩果酸抗矽肺大鼠TNF-α和胶原表达的实验研究

目的:观察齐墩果酸对矽肺大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)和胶原表达的影响及其可能作用机制。方法:80只SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为对照组、模型组、齐墩果酸组和溶剂组,每组20只。除对照组外,其余组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入Si O2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型。齐墩果酸组自注射Si O2后每天给予齐墩果酸60 mg/kg灌胃,溶剂组每天用0.6%羧甲基纤维素钠溶液(10 m L/kg)灌胃,对照组用生理盐水(10 m L/kg)灌胃,连续56 d。动物分别在注射Si O2后第7、14、28和56天处死(每次每组5只)。处死后检测各组大鼠肺系数,并观察形态学变化;应用ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量;试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量;免疫组织化学法检测肺组织核因子κB(NF-κB)表达。结果:(1)与对照组比较,模型组和溶剂组大鼠肺系数和总胶原蛋白含量明显升高,结合形态学变化,矽肺模型造模成功。齐墩果酸组各时点肺系数和总胶原蛋白含量比模型组和溶剂组相应时点低,但比对照组高。(2)模型组和溶剂组大鼠血清中的TNF-α含量各时点明显升高,高峰在第14天,之后稍降,但明显高于对照组,差异有统计学意义;模型组与溶剂组各时点比较,差异无统计学意义。齐墩果酸组TNF-α含量与模型组相比均降低,各时点比较差异有统计学意义。(3)模型组和溶剂组大鼠肺组织中NF-κB表达量逐渐升高,至第28天达高峰,各时点与对照组比较差异均有统计学意义。齐墩果酸组的NF-κB阳性表达趋势与模型组相同,但明显低于模型组而高于对照组,各时点与对照组比较差异有统计学意义。结论:齐墩果酸通过抑制TNF-α和胶原表达减缓矽肺纤维化的发生,可能与NF-κB通路有关。     

CUY21EDITⅡ超级多脉冲活体/细胞电转化仪转染外源基因至神经干细胞的优化方案

目的:优化CUY21EDITⅡ电转仪介导真核表达载体p EGFP-N1转染大鼠来源的神经干细胞(NSCs)的转染条件,提高外源基因转染NSCs的转染效率,为后续试验提供基础。方法:在保持驱动电压(Pd V)、脉冲时间、循环次数等条件不变的情况下,通过改变电转电压(Pp V),将已构建好的表达绿色荧光蛋白的重组载体p EGFP-N1以CUY21EDITII电转仪转染导入NSCs,转染后48 h在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率。结果:p EGFP-N1质粒在Pp V为350 V,Pd V为20 V,脉冲时间为10 ms,循环次数为20次的转染条件下,可获得较理想的转染效率,转染效率平均为81.0%,细胞存活率为72.0%。结论:通过优化转染条件,CUY21EDITⅡ电转仪能提高p EGFP-N1转染NSCs的转染效率,与脂质体相比优势明显。     

AcSDKP对矽肺大鼠细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路调节的作用

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对矽肺大鼠纤维化肺组织中c-Raf、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响,以探讨AcSDKP对Ras-Raf-ERK1/2信号转导通路调节的作用.方法 选用非暴露式气管灌注法复制大鼠矽肺模型,60只大鼠随机分为6组,每组10只.对照1组(4周后处死)和对照2组(8周后处死):支气管内均灌注生理盐水1.0 ml/只;矽肺模型1组(4周后处死)和矽肺模型2组(8周后处死):支气管内灌注SiO2混悬液1 ml/只(SiO250mg/ml);抗纤维化治疗组(治疗组):支气管内灌注SiO2混悬液1 ml/只,4周后给予AcSDKP 800μg·kg-1·d-1,并持续至第8周处死;预防治疗组:给予AcSDKP 800μg·kg-1·d-148 h后,支气管内灌注SiO2混悬液1 ml/只,8周后处死.采用免疫组织化学法和免疫印迹(Western blot)法对矽肺大鼠肺内c-Raf、磷酸化-c-Raf、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2和TGF-β1的蛋白表达进行检测.结果 与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内磷酸化-c-Raf、磷酸化-ERK1/2和TGF-β1蛋白表达均增加;与相应矽肺模型组相比,治疗组大鼠肺组织内磷酸化-c-Raf、磷酸化-ERK1/2和TGF-β1蛋白表达均明显降低,其中,治疗组磷酸化-c-Raf、磷酸化-ERK1/2和TGF-β1蛋白表达分别为矽肺模型1组的52.25%、51.72%、67.74%,为矽肺模型2组的49.37%、55.76%、65.63%;预防治疗组蛋白表达分别为矽肺模型2组的54.64%、55.76%、78.91%,差异均有统计学意义(P＜0.05).而各组间比较c-Raf、ERK1/2蛋白表达无明显改变.结论 AcSDKP可能是通过抑制TGF-β1介导的Ras/Raf/ERK1/2信号通路发挥拮抗矽肺纤维化的作用.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对染尘大鼠造血系统的影响

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AeSDKP)在给药剂量(800 μg·kg-1·d-1)下对染尘大鼠造血系统的影响.方法 经气管给大鼠注入游离二氧化硅粉尘,并给予AcSDKP.通过血常规、骨髓涂片及血药浓度检测观察AcSDKP对造血系统的影响.结果 红细胞、血小板计数和原始粒细胞、有核红细胞和原始淋巴细胞总数在各组间差异无显著性(P>0.05);而白细胞计数在染尘组和AcSDKP治疗组均较对照组增高约1.3倍.结论 AcSDKP在一定给药剂量下对大鼠造血系统没有明显抑制作用.     

颈内动脉刺破法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型

目的通过图文结合的形式,详细介绍大鼠蛛网膜下腔出血模型的制作方法及过程;改进并创新模型,使其能更好的模拟临床动脉瘤破裂所致蛛网膜下腔出血。方法选取SD雄性大鼠,采用颈内动脉颅外段穿入颈内段法,建立SD雄性大鼠蛛网膜下腔出血模型,用呼吸、瞳孔、大小便及留置纤芯解剖大鼠头颈等方法对模型进行验证。通过观察死亡率和临床表现,探讨模型的可控性、可重复性。结果实现了刺破血管造成蛛网膜下腔出血,且纤芯到达的位置能准确的刺破所需要的血管。结论此法制作模型稳定,方法通俗易懂,操作精巧灵活,可重复性强,理解后短时间内就可造模成功,且成功造模所形成的蛛网膜下腔出血,能更好地模拟临床动脉瘤突然破裂出血,非常适用于蛛网膜下腔出血早期脑损害及其血管痉挛的研究。     

维生素C干预对高温诱导大鼠免疫参数变化的影响

目的 探讨维生素C(vitamin C,VC)对高温暴露引起大鼠免疫功能失调的干预效果。方法24只SPF级的8 w龄雄性SD大鼠,适应性喂养1 w后,随机分为常温对照组(NC)、高温暴露组(HE)、HE+VC 10 mg/kg组和HE+VC 14 mg/kg组,每组6只。两个干预组每天早晨按1.0 ml/100 g体质量给予1.0、1.4 g/L的VC溶液灌胃,其它组给予等量蒸馏水灌胃;各HE组每日上、下午进行湿球黑球温度(wet bulb globe temperature,WBGT)指数(22±1)℃、(33±1)℃环境下的跑台运动,每次30 min,每周6 d;连续4 w。于实验第29 d处死各组大鼠,采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺和CD16⁺和CD45⁺占比,采用酶联免疫法测定血清中肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-2和IL-6水平、以及免疫球蛋...